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东北大学研究人员开发新型零模测序波导

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这个故事已经更新,包括关于DNA片段研究作者的额外信息。

纽约——来自东北大学的研究人员已经创造了一种新的零模波导(ZMW)测序技术,这是太平洋生物科学公司长读平台的基础技术,他们计划利用美国国立卫生研究院最近提供的资金,探索该技术用于RNA测序。vwin德赢ac米兰合作

在东北大学物理、化学和化学生物学教授Meni Wanunu的领导下,该团队开发了光电ZMW (eZMWs),它在构成每个ZMW的井底添加了一个电极。这一进步有助于每个特征的DNA加载,消除了在更普通的技术版本中出现的长度偏差,并解锁了用少量DNA对样本进行测序的能力——可能是在picgraph之下。vwin德赢ac米兰合作

“所有测序方法的挑战之一是,你需要通过DNA扩增来准备文库,”Wanunu说。“现在,一切都依赖于创建库和添加适配器。我们正试图消除放大的部分。”

DNA扩增的问题是关键信息会丢失,“主要的问题是观察化学修饰的能力,”他补充说。

哈佛大学名誉教授、纳米技术在测序中的应用专家Dan Branton说:“他们所展示的非常直接。”vwin德赢ac米兰合作“从本质上说,DNA的浓度会比没有电动势的情况下更好地覆盖波导。”

他补充说:“我认为这对单分子实时测序仪的功能和利用来说是一个非常有价值的补充。”

在2021年12月发表的概念验证工作中先进材料在美国,瓦努努的实验室使用新型ezmw对DNA片段进行了测序。分子长度从260bp到26kb不等。但这项技术的真正力量可能是它直接测序RNA的潜力。vwin德赢ac米兰合作瓦努努的实验室已经收到220万美元的资金,用于探索这一方向,包括2022年的858,993美元。

这项工作建立在ZMW技术基础上的太平洋生物科学公司的长vwin德赢ac米兰合作读测序方法。瓦努努和PacBio CSO Jonas Korlach至少是合作编写的一篇论文Korlach在今年AGBT的海报上被命名为合作伙伴,标题与先进材料纸;然而,Korlach并没有被列为论文的作者。瓦努努说,他向科拉赫提出了论文的作者身份,但科拉赫拒绝了他的提议。PacBio没有立即回应置评请求。瓦努努和科拉赫也是国家人类基因组研究所2012年授予的82.5万美元资助的联合pi。

瓦努努说,他“与该公司没有正式关系”,尽管PacBio在瓦努努实验室建造设备时获得了一笔用于测序样本的补助金,该实验室也收到了试剂的实物捐赠。但除此之外,PacBio似乎与eZMW研究保持一定距离。“我们不得不重建PacBio瓦努努说,这导致长时间读取的准确性较低。“这仍然是我们正在努力解决的问题。几百万美元不足以建造PacBio拥有的最先进的机器。”此外,PacBio还没有向实验室提供它的软件,这将有助于提高精确度,他说。

eZMW的工作还建立在利用纳米孔帮助将分子吸引到波导上的尝试之上。2016年至2019年,瓦努努实验室获得了约230万美元的NHGRI资助,用于“使用纳米孔ZMWs直接picogram DNA和RNA测序”。2017年,瓦努努和科拉赫发表了一份自然纳米技术vwin德赢ac米兰合作表现出较长分子的优先负载和较低的输入要求。

但是根据研究生Fatemeh Farhangdoust的说法,纳米孔膜会导致短路并增加背景噪声,他领导了充电并提出了一种替代方案,在波导下几纳米处放置一个电极。“现在这个新平台非常稳定,”她说。“从晶圆中取出的每个芯片都是可用的,而且很容易扩大规模。”

该团队与康奈尔大学纳米科学与技术设施合作,该设施拥有制造ezmw所需的锶光刻和束蒸发器。vwin德赢ac米兰合作瓦努努表示,他已经提交了ezmw的专利申请。

虽然去年的论文帮助证明了该技术的概念,但法汉杜斯特指出,“能够快速识别DNA是有应用价值的。”vwin德赢ac米兰合作

一个是研究未知样本。“如果你能快速读出,你就能识别出哪些基因组存在,”Wanunu说,特别是如果你有一个宏基因组数据库来比较序列。

此外,低输入DNA要求可能有助于液体活检分析,尽管准确性问题将排除目前的应用。瓦努努说,实验室正在努力克服这些问题,并指出他已经聘请了一名软件工程师来提高准确性,目标是将百分比提高到90%以上。

尽管他们还没有证明,至少没有公开证明,但ezmw的杀手级应用可能是RNA测序的能力。他说:“这就是它的发展方向:无需制作RNA文库和扩增子的单细胞RNA测序。”

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