NewYORK-Researchs开发出新版Cas9酶基因编辑,不太可能离目标切除,但仍能像野型酶一样快速工作
CRISPR-Cas9基因组编辑的绊脚石是Cas9离目标切分的可能性,它可能诱发新变异而非修复现有变异开发其他形式的Cas9是为了提高精度,但Austin德克萨斯大学的研究人员表示,这些微信大都以效率为代价。
得克萨斯团队使用动能引导低温显微镜检查Cas9在不同点中相片切片通过它,他们发现结构特征稳定Cas9匹配脱氧核糖核酸复合体,使酶切片as报文性质星期三重构稳定特征引出一种叫Sperfi-Cas9的酶,它像野型Cas9一样频繁切正确目标,但不太可能切错目标
Kenneth Johnson, UT-Austin分子生物科学教授,
使用隐式EM生成图片 显示Cas9相匹配脱氧核糖核酸结构
开始聚焦于Cas9样本与12到14基对不匹配样本中发生Cas9激活,但割裂慢于平时
具体地说,研究人员识别出这些样本中两种不同的Cas9一致性线性双工分解主要出现在初始样本中短切分解时间,而分解加康康双工分解则出现在样本中长分解时间基于此,研究者猜想线性双分解表示Cas9早期中间值
Cas9样本与18到20基对脱钩使用隐式EM研究者再次发现线性相联和感动相联,但也注意到电动相联中存在两个链路域,将HNH连接到Cas9其余部分并锁入相联特别是RuvC域重构回路似乎稳定交互作用,并可能使Cas9激活,尽管不匹配
原创人Jack Bravo在UT-Austin声明中表示:仍可起轮椅作用 但它可能有点摇摇欲坠这是一个相当肮脏的修复方法。”
研究结果还建议研究者设计新Cas9酶超Fi-Cas9中所有7稳定残留物变异为单向酸超Fi-Cas9报告目标脱氧核糖核酸的速率类似于野型Cas9,而18至20基距离脱氧核糖核酸配对减速500倍
研究者指出,到目前为止,他们只测试测试管内脱氧核糖核酸SUPFi-Cas9,但现在正与协作者合作在活细胞内测试它。